树突状细胞疫苗联合抗抗体治疗小鼠肝癌的实验(2)
分别收集提取小鼠骨髓第1天的骨髓细胞和培养7 d后的细胞,用抗CD11c-PE抗体对其染色,用流式细胞分析仪检测CD11c+细胞的百分比含量。结果显示,骨髓细胞提取当天CD11c+细胞比例为0.7%,见图1a。经IL-4和GM-CSF因子诱导扩增7 d后,CD11c+细胞的比例为99%,见图1b。说明经过因子诱导后,获得了大量高纯度的树突状细胞。
2.2肿瘤生长情况
树突状细胞疫苗和抗PD-L1抗体联合治疗组肿瘤大小明显小于对照组,以及单独使用疫苗组和单独使用抗体治疗组;树突状细胞疫苗和抗PD-L1抗体单独治疗组肿瘤分别与对照组相比也显著缩小,见表1。
图1 小鼠骨髓CD11c+细胞比例表1不同治疗组肿瘤大小、脾淋巴细胞杀伤率及干扰素γ的分泌水平
组别肿瘤大小/mm2杀伤率/%干扰素γ水平/(pg·mL-1)对照组187.树突状细胞疫苗治疗组95.#43.#560.#抗PD-L1抗体治疗组122.#36.#478.#联合治疗组78.?57.?887.?
2.3细胞毒性T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用
树突状细胞疫苗和抗PD-L1抗体联合治疗组的脾淋巴细胞对H22肝癌细胞杀伤率明显高于对照组,以及使用疫苗组和抗体单独治疗组;树突状细胞疫苗和抗PD-L1抗体单独治疗组分别与对照组相比,杀伤率也显著提高,见表1。
2.4干扰素γ分泌水平
树突状细胞疫苗和抗PD-L1抗体联合治疗组的脾淋巴细胞与H22肝癌细胞共孵育分泌的干扰素γ显著高于对照组,以及疫苗和抗体单独治疗组;树突状细胞疫苗和抗PD-L1抗体单独治疗组干扰素γ的分泌水平分别与对照组相比,也显著提高,见表1。
3讨论
我国原发性肝癌的病死率仅次于肺癌,且起病隐匿,不易早期诊断,手术切除难度大,危险性高,且对放化疗不敏感。因此探索更有效的肝癌治疗方案成为一个亟待解决的问题。随着免疫治疗的研究不断深入,其应用范围也不断扩大,树突状细胞疫苗因其出色的治疗效果成为免疫治疗研究的热点,因此将树突状细胞疫苗应用于肝癌治疗中可能成为一种潜在的有效治疗方案。
树突状细胞作为体内功能最强的抗原提呈细胞,将摄取的肿瘤抗原加工处理后,提呈给T细胞,促进T细胞激活。活化的CD8+T细胞能够直接识别DC递呈的肿瘤抗原,从而杀死肿瘤细胞,而CD4+T细胞活化后,通过分泌干扰素,白介素2等细胞因子来辅助CD8+T细胞对肿瘤的杀伤作用。通过反复冻融肿瘤细胞获得肿瘤细胞的完全抗原,并用其负载体外培养扩增的DC,制备成DC疫苗。DC疫苗目前已经应用于多种肿瘤的治疗,部分取得了不错的治疗效果。然而,肿瘤能够通过多种免疫逃逸机制,逃避T细胞的杀伤,DC疫苗单独使用的临床效果并不是很理想,客观有效率只有12.7%[8]。因此,如何阻止肿瘤发生免疫逃逸成为免疫治疗成功与否的关键。
免疫检查点是一系列具有负性调节功能的蛋白,在免疫系统中起到“刹车作用”,防止过度激活的T细胞对机体自身产生炎性损伤。但肿瘤利用这一特点,过度表达免疫检查点,从而抑制T细胞对肿瘤发挥杀伤作用。机体发生肿瘤后,PD-1/PD-L1这对免疫检查点在机体内过表达,降低组织中T细胞的活性,抑制其杀伤作用,形成肿瘤微环境中的免疫耐受。目前,DC疫苗与PD-L1抗体已经联合应用于多种小鼠肿瘤模型的治疗中[9],因此,我们将抗PD-L1抗体与DC疫苗联合应用于小鼠肝癌模型中,使DC疫苗将肝癌抗原有效递呈给T细胞后,刺激T细胞活化,对肿瘤发挥杀伤作用。与此同时,给予抗PD-L1抗体,抑制PD-1/PD-L1通路的激活,从而使肿瘤无法在微环境中发生免疫逃逸。我们发现,DC疫苗与抗PD-L1抗体联合治疗显著抑制了肿瘤生长,且抑制效果好于单独治疗效果,这意味着抗PD-L1抗体对DC疫苗治疗肿瘤效果起到协同作用。
通过细胞毒性试验和细胞因子分泌水平检测抗肿瘤治疗的免疫反应机制。相比于单独治疗,联合治疗组小鼠的脾淋巴细胞有更高的细胞毒性,提示抗PD-L1抗体提高了CD8+T细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。在细胞因子分泌检测试验中,联合治疗组小鼠的脾淋巴细胞与肿瘤细胞共孵育后能够分泌更多的干扰素γ,表明联合治疗提高了CD4+T细胞分泌因子的活性,并且干扰素γ能够激活CD8+T的杀伤活性。
综合实验结果,我们发现DC疫苗与抗PD-L1联合应用能够有效的提高对肝癌的治疗效果。为临床的肝癌治疗提供了一条新思路,具有广泛的应用前景。
[1] 王征帆,王豪勋,李楠,等. 原发性肝癌PD-L1和PD-L2表达[J].医药论坛杂志,2017,(02):14-15.
[2] 任书荣,王秋波,张艳丽,等. 树突状细胞疫苗联合Imiquimod对小鼠乳腺肿瘤的治疗作用[J].免疫学杂志,2016,(10):890-894.
文章来源:《中国肿瘤生物治疗杂志》 网址: http://www.zgzlswzlzz.cn/qikandaodu/2021/0223/501.html